Técnicas agrobiotecnológicas más empleadas
Marcadores moleculares
Se utilizan las proteínas e isoenzimas, ya que pueden ser fácilmente extraídas y analizadas. Las isoenzimas representan diferentes formas moleculares de una misma enzima que muestran especificidad por el mismo sustrato. Por ejemplo, las distintas formas moleculares de la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) se diferencian por la carga eléctrica neta o el peso molecular, pero todas deshidrogenan el alcohol (sustrato) para convertirlo en aldehído.
La técnica utilizada para estudiar las isoenzimas es la electroforesis, que permite separar las moléculas por su carga y tamaño sometiéndolas a un campo eléctrico en una matriz líquida o sólida. Las moléculas de mayor tamaño migrarán menos hacia el cátodo, al igual que aquellas que tengan baja carga positiva.
Se puede averiguar el número de loci que codifican para el sistema enzimático analizado, el número de alelos en cada locus y las relaciones de dominancia entre dichos alelos utilizando las leyes de Mendel. Para ello, es necesario conocer la estructura cuaternaria de la enzima, la cual puede ser monómera (una cadena de polipéptidos), dímera (dos cadenas) o tetrámera (cuatro cadenas).
En plantas, se utilizan como marcadores las proteínas de reserva que se encuentran en el endosperma. Su alta variabilidad (polimorfismo) ha sido muy útil en la identificación de variedades y la producción de semilla certificada.
Enzimas de restricción
Son también llamadas endonucleasas de restricción. Se aislaron por primera vez a partir de bacterias, organismos que las utilizan como defensa ante el ataque de bacteriófagos. Actúan cortando el ADN viral en varios trozos de manera que éste no pueda reproducirse.
Reconocen secuencias específicas de nucleótidos, los sitios de restricción, y cortan la doble hélice en ese mismo lugar o muy cerca de allí. Las más usadas en biotecnología son aquellas que reconocen secuencias palindrómicas cortas (se leen igual en ambos sentidos) de 4-8 pares de bases, permitiéndole al investigador trabajar con fragmentos más pequeños y más fáciles de estudiar mediante electroforesis.
La acción que ejercen estas enzimas sobre el ADN es conocida como digestión y cada genoma tiene un “patrón de restricción” definido de acuerdo con la enzima utilizada.
